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Hemoglobina Glicada - HbA1c
Hemoglobina Glicada - HbA1c / método turbidimétrico
Mucio Vieira
16/8/2005 

Hemoglobina Glicada (glicosilada ou glico –hemoglobina):

 

Em adultos, os eritrócitos normais contêm hemoglobina A (97% do total), HbA2 (2,5%) e HbF (0,5%).

Por diferentes métodos eletroforéticos e cromatográficos, foram detectadas subfrações da hemoglobina A, identificadas como HbA1a, HbA1b, e HbA1c e, coletivamente denominadas hemglobinas glicadas, (hemoglobinas glicosiladas ou glico-hemoglobinas).

A fração HbA1c constitui, aproximadamente, 80% da HbA. As hemoglobinas glicadas são formadas pela adição espontânea de glicose ao grupo amino terminal livre das proteínas hemoglobínicas, por reações não enzimáticas.

A velocidade de síntese é proporcional à concentração de glicose onde os eritrócitos estão expostos. Os conteúdos destas subfrações aumentam com a idade dos eritrócitos.

 

O estudo dessas hemoglobinas é realizado, principalmente pela medição da subfração HbA1c em pacientes com diabetes mellitus.

Esta avaliação indica o controle metabólico do paciente nas 8 a 10 semanas precedentes ao teste, enquanto a glicemia reflete o controle somente nas 24 horas anteriores.

 

A HbA1c deve ser monitorada a cada três ou quatro meses em pacientes diabéticos estáveis e, a cada um ou dois meses , em pacientes diabéticos com pobre controle glicêmico.

Grávidas diabéticas (especialmente do tipo I) são avaliadas uma a duas vezes ao mês para um controle mais efetivo.

A terapêutica insulínica deve ser ajustada em pacientes diabéticos, se a HBA1c ultrapassar 10%. Na monitoração de diabéticos, variações de 2% entre duas avaliações é considerada clinicamente significante e indicativa de um melhor ou pior controle glicêmico.

 

O teste não é adequado para o monitoramento de pacientes diabéticos portadores de hemoglobinopatias, pois a  presença de variantes da hemoglobina provoca redução da meia-vida  das hemátias e, portanto , do tempo de exposição da hemoglobina às variações dos teores de glicose circulante, diminuindo o percentual de hemoglobina glicada.
Nesses casos é recomendado o acompanhamento desses pacientes pela dosagem de frutosamina.

 

 

Representação gráfica de moléculas de glicose ligadas  irreversivelmente à hemoglobina (re-arranjo de Arnoldi).

 

Determinação da Glico –hemoglobina:

  • Paciente:  Não é necessário jejum para a coleta do material.
  • Amostra:  Sangue total colhido em contendo anticoagulante EDTA-K2. O sangue pode ser armazenado em refrigerador por uma semana. Amostras heparinizadas devem ser ensaiadas no máximo em 48 horas.
  • Interferências: 
    - Resultados Falsamente elevados:
    Ácido acetilsalicílico, antimicrobianos, álcool, hiperlipemia, temperatura e/ou pH do tampão fora das especificações do método.
    - Resultados falsamente reduzidos:
    Variantes da hemoglobina (HbS, HbC, ou HbD), temperatura e/ou pH do tampão fora das especificações do método.
  • Cuidados na interpretação dos resultados de HbA1c:
    - Valores maiores que os esperados:
    O paciente pode estar “manipulando” os valores de glicemia ( uso de hipoglicemiantes) ou conseguiu melhorar o controle glicêmico nas duas semanas anteriores ao exame.
    Existe a possibilidade de a glicemia estar mais elevada em períodos que não habitualmente avaliados (p.ex: entre as refeições)
    Anemia por carência de ferro, vitamina B12 ou folato constitui um fator que pode levar a um valor falsamente elevado por aumentar a sobrevida das hemácias.
    -
    Valores menores que os esperados:
    A hemólise e o tratamento intensivo da anemia por carência de ferro, vitamina B12  ou folato, podem resultar em valores falsamente diminuídos, por reduzirem a sobrevida das hemácias durante o período do tratamento.
  • Métodos:
    Embora existam diversos métodos para a quantificação  da HbA1c, tais métodos podem ser divididos em dois grandes grupos, de acordo com o princípio utilizado:
    A separação por diferenças estruturais :  cromatografia HPLC / coluna e eletroforese.
    A separação por diferença de carga elétrica: cromatografia de troca iônica HPLC / coluna e método imunoenzimático.



A cromatografia por troca iônica sofre a interferência de hemoglobinas variantes, como HbS e HbC e também por drogas ou substâncias que alteram a carga da hemoglobina.

Já a cromatografia de afinidade não sofre a influência das hemoglobinas variantes e nem de medicamentos.

No entanto , não consegue quantificar a fração A1c e sim o total de hemoglobinas glicosiladas.

A literatura tem apontado  a quantificação da HbA1c  por HPLC como o método referendado pelo DCCT (Diabetes Control and Complications Trial)

 

 

Entretanto,  um novo método  (imunoturbidimétrico) foi desenvolvido e utiliza-se da interação Antígeno/Anticorpo para a determinação da Hemoglobina Glicada de forma direta.

O método baseia- se no fato de a hemoglobina total e a fração HbA1c, possuírem o mesmo coeficiente inespecífico de absorção às partículas de látex.

Quando um anticorpo monoclonal de camundongo [anti HbA1c – humana] é adicionado , um complexo [látex / HbA1c-anti humana] é formado.

Em um segundo passo da reação , pela adição de IgG policlonal de cabra anti-camundongo, obtém-se uma aglutinação pela interação entre estes dois complexos antígeno/anticorpo.

A aglutinação obtida , é diretamente proporcional à quantidade de HbA1c absorvida na superfície das partículas de látex.

A calibração e a quantificação  do teste é obtida através de uma curva de calibração.  

Desta forma, a subfração HbA1c é específicamente quantificada, determinando maior precisão e especificidade no controle do Diabetes mellitus.

 

Mercado:

 

O kit para determinação da subfração HbA1c desenvolvido pela Biotécnica – HEMOGLOBINA GLICOSILADA  CAT 20.044.0  com apresentação de 15 + 5 ml, proporcionando a preparação de 20 ml de reativo de trabalho, é composto por:

  • R1   -  Reagente de látex a 0,13% em tampão glicina.
  • R2a -  Tampão glicina 80 mmmol/l
  • R2b -   Anticorpo monoclonal de camundongo , anti HbA1c humana e anticorpo  policlonal de cabra anti camundongo.
  • Solução hemolisante : Para tratamento prévio da amostra.
  • Calibrador liofilizado:  Para  realização da curva de calibração dos testes. (fornecido em separado)

 

Atualmente o mercado diagnóstico apresenta kits em coluna de troca iônica e reagentes para HPLC (associados ao equipamento ).

Somente a Roche Diagnóstica apresentou um kit baseado no método imunoturbidimétrico (Tinia-Quant).

 

Fabricante

Método

HbA1c
Específico

Complexo

HbA1

Testes

por kit

Doles Crom. Troca Iônica Não Sim 26
In Vitro Resina Troca iônica Human Não Sim 30 / 60
Laborclin Resina Troca iônica Não Sim 25
Dialab Resina Troca iônica Human Não Sim 30 / 60
Eurotech Turbidimetria Pointe Scientific Sim Não 40 / 120
Biosystems Crom Troca iônica Sim Não 20 / 100
Gold Analisa Crom. Troca iônica Biosystems Sim Não 20 / 100
Katal Resina troca iônica Não Sim 25
Labtest Resina troca iônica Não Sim 25
Roche Turbidimetria Sim Não 678
Randox Turbidimetria (dimension) Sim Não 345
BIOTÉCNICA Turbidimetria Duplo anticorpo Sim Não 20

Vantagem Competitiva:

  • Calibrador incluído no kit:
    Permite ao usuário realizar sua curava de calibração segundo sua necessidade de trabalho, mantendo a dosagem sempre confiável e controlada.
  • Apresentação:
    Apresentação de 15 + 5ml,favorece pequenos volumes de trabalho diário, sem comprometer a validade do reativo de trabalho e o rendimento do kit.
    Laboratórios maiores podem consumir toda a apresentação em uma única rotina.
  • Método Imunoturbidimétrico:
    Método mais preciso que a coluna de troca iônica, com utilização de duplo anticorpo, proporciona  realização do teste para quantificação e específica da subfração  A1C da hemoglobina.
    O método pode ser automatizado e utiliza qualquer analisador bioquímico de rotina, não necessitando de equipamento específico para o teste.
  • Solução hemolisante:
    Fornecida junto com o kit, proporciona preparação correta da amostra , sem erros pré-analiticos.
  • Assessoria Científica:
    Permanentemente em contato com o Distribuidor e fornecendo material técnico de suporte ao cliente.
  • Programações para analisadores bioquímicos:
    Programações já disponíveis e anexadas à este informe.

 
 

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